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Tet-uPA小鼠

基本信息

品系名称:B6.Cg-Tg(tetO- Alb- uPA)1 Vst /Vst

常用名: Tet-uPATg小鼠; Tet-uPA小鼠

背景:C57BL/6NCrl

毛色:黑色

鉴定方法:黑色


品系建立:

Tet-uPA小鼠是肝脏特异表达的Alb启动子/增强子驱动的rtTA基因和TRE-uPA基因片段转入小鼠建立的Tet-On调控的uPA转基因小鼠,在Dox诱导下uPA在肝脏表达,可引起肝损伤(如图1所示)。维通达建立的Tet-uPA小鼠品系是由混合背景的转基因首建鼠与C57BL/6NCRL小鼠回交10代获得的。Tet-uPA小鼠的优点是小鼠在未诱导时呈健康状态,在Dox给药诱导时才出现肝损伤,而且可以通过Dox的剂量控制肝损伤程度。

2006年,维通达研究人员构建了TRE-uPA 转基因小鼠和Alb-rtTA转基因小鼠,然后交配获得了Alb-rtTA/TRE-uPA双阳性小鼠;通过Dox诱导,在该小鼠中检测到了uPA表达和肝损伤[1]。维通达技术人员将Alb-rtTA/TRE-uPA双阳性小鼠连续8代回交到C57BL/6 NCrl,2018年获得Tet-uPA B6小鼠。


模型特征

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图1 uPA基因在肝细胞的可调控表达。

 


繁育信息

交配方式:纯合扩繁

日粮信息:SPF 繁殖鼠粮

平均产子数:6

繁育周期(周):32


基因型鉴定信息

基因

引物

序列(5---3)

产物大小

uPA

uPA-F

GTCGAGTAGGCGTGTACGGT

400bp(positive)

uPA-R

CCATTTCCATGATAGCAGGT

rtTA

rtTA-F

GCTCCAGATGGCAAACATACGC

640bp(positive)

rtTA-R

TTCCTCCAATACGCAGCCCAGT


表型

Tet-uPA B6小鼠,可以在任何时间用Dox诱导肝损伤。此前研究发现,小鼠肝脏特异性过表达尿激酶型纤溶酶原激活蛋白(urokinase-type plasminogen activator,uPA)可引起肝细胞坏死,即uPA转基因小鼠可以作为肝损伤模型。但是uPA转基因鼠的缺点是死亡率高,难于繁殖。北京维通达公司开发了可调控的更接近生理性条件的肝损伤模型Tet-uPA转基因小鼠。这种小鼠转入了两个基因片段,一段是Alb-rtTA,一段是TRE-uPA,构成在肝细胞内特异表达的Tet-On系统调控的uPA转基因结构。Tet-uPA小鼠在不诱导的情况下是完全健康状态,可以正常繁殖;当用四环素类药物Dox诱导时,uPA在肝细胞内表达,引起肝损伤。既可以用高剂量Dox诱导产生急性肝损伤甚至肝衰竭的表型,也可以用较低剂量持续诱导成为慢性肝损伤。在合适的时间窗口诱导uPA表达,并结合高脂饮食,Tet-uPA小鼠可以诱导成非酒精性脂肪变性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)、肝硬化和肝癌模型。因而Tet-uPA小鼠是肝损伤机理研究、保肝药物和NASH药物药效评价的理想模型。

目前业界认为最好NASH和肝癌小鼠模型是DIAMOND模型和MUP-uPA模型,而Tet-uPA比MUP-uPA小鼠更具优势,因为MUP-uPA小鼠是在接近成体时(5、6周龄)表达uPA,窗口期有一定限制,而Tet-uPA小鼠可以在任意时期诱导uPA的表达。


image.png

B6.Tet-uPA小鼠注射Dox(100mg/kg)后血清ALT/AST

 


image.png

B6.Tet-uPA诱导肝损伤并HDF饲喂3个月,可以诱导类似于人的NASH模型


image.pngimage.png

天狼猩红染色                    HE染色


应用领域

1.急慢性肝损伤模型等相关研究。

2.NASH模型、肝癌模型、以及药物安全性评估等相关研究。


参考文献

1.A Mouse Model of Inducible Liver Injury Caused by Tet-On Regulated Urokinase for Studies of Hepatocyte Transplantation.The American Journal of Pathology.Volume 175, Issue 5, November 2009, Pages 1975-1983.

2.Preclinical Models for Studying NASH-Driven HCC: How Useful Are They?Cell Metabolism 29, January 8, 2019


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